ELISA試劑盒以靈敏度較高、特異性較好的特點在上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。下面分析ELISA試劑盒操作中可能影響結果的原因，并給出相應的解決辦法。
目前用于紡織退漿的淀粉酶主要ELISA試劑盒，淀粉糖化酶（β-淀粉酶），胰淀粉酶，麥芽淀粉酶等。我國主要采用耐熱性強的枯草桿菌淀粉酶即α-淀粉酶（枯草桿菌），β淀粉酶屬于一種細菌淀粉酶是由地衣芽孢桿菌經液體深層發酵，提取等工序精制而成的淺褐色液體生物制劑，廣泛應用于啤酒等生產中。它對溫度有較強的適應能力。它并非為單一為單一淀粉酶，還含有其它酶組分。后者含量較少，但它們的存在有利于去除織物上的油脂，蛋白質等雜質。
實驗顯示，ELISA試劑盒經過正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，人正常肝細胞這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，人白介素ELISA試劑盒而把血清放在37℃環境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
ELISA試劑盒于動物（唾液、胰臟等）、植物（麥芽、山萮菜）及微生物。微生物的酶幾乎都是分泌性的。此酶以Ca2+為必需因子并作為穩定因子和激活因子，也有部分淀粉酶為非Ca2+依賴型。淀粉酶既作用于直鏈淀粉，亦作用于支鏈淀粉，無差別地隨機切斷糖鏈內部的α－1，4-鏈。因此，其特征是引起底物溶液粘度的急劇下降和碘反應的消失，zui終產物在分解直鏈淀粉時以葡萄糖為主，此外，還有少量麥芽三糖及麥芽糖，其中真菌a-淀粉酶水解淀粉的終產物主要以麥芽糖為主且不含大分子極限糊精，在烘焙業和麥芽糖制造業具有廣泛的應用。另一方面在分解支鏈淀粉時，除麥芽糖、葡萄糖、麥芽三糖外，還生成分支部分具有α-1，6-鍵的α-極限糊精（又稱α-糊精）。一般分解限度以葡萄糖為準是35-50%，但在細菌的淀粉酶中，亦有呈現高達70%分解限度的（zui終游離出葡萄糖）；
一、選擇試劑
選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
二、加樣
大鼠成纖維細胞生長因子ELISA試劑盒可能原因：
1）血清或血漿標本分離不好即進行加樣；
2）手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內溫度較高時）；
3）加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。
大鼠成纖維細胞生長因子ELISA試劑盒解決辦法：
1） 標本為血清：將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘；若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。
2） 加樣后及時放入孵箱。
3） 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。
4） 如果采用AT或其他全自動加樣，選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。
5） 標本較多時，請分批操作。
常見ELISA試劑盒實驗技術要點，不看就沒了！
我公司技術專員對解析出其實驗技術要點，下面一起來看看吧。
1. 準備好所有實驗額外所需物品，如試管、吸頭、移液器、離心機等；
2. 根據檢測標本數量確定所需試劑的量；
3. 按說明書將所用試劑平衡至室溫，配制所需試劑；
4. 標本制備要規范，每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備，盡量分裝做備份。短期內無法實驗者，注意低溫保存。
實驗中為了確定*佳信號和*背景應將捕獲抗體（0.5-4μg/ml）和檢測抗體（0.25-2μg/ml）在預實驗中進行彼此相抗的滴定。同時，應包括在適當范圍內的標準品的系列稀釋。按試劑說明書常規提供的范圍進行操作。
標準品的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說明書，注意每批的細節。在使用細胞因子前，瞬時離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的細胞因子。根據每批說明書中的細節，將凍干的細胞因子復溶。
一般待測抗原標準曲線的線性范圍的可通過將標準品做8次2倍系列稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml?？衫脴藴实腅LISA操作流程、放大試劑盒、第三類試劑、或改變酶底物系統可在一定范圍內提高靈敏度。
為了優化靈敏度，建議過夜孵育標準品和標本。若使用過氧化物酶作為顯色系統，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮鈉，疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當測定混合液體中的抗原時，如血清，建議在標本稀釋液中加不相干的Ig。
掃一掃，關注微信
當前位置：